遺傳性耳聾相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)遺傳性耳聾相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)遺傳性耳聾相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

耳聾是一種常見的感覺障礙性疾病，耳聾病因復(fù)雜，目前研究認(rèn)為約60％重度耳聾的發(fā)病與遺傳有關(guān)。遺傳性耳聾主要涉及四種遺傳方式：常染色體隱性、常染色體顯性、線粒體遺傳、性染色體連鎖遺傳。按耳聾和言語功能發(fā)育的關(guān)系可分為語前聾和語后聾。言語功能發(fā)育之前發(fā)生的重度或極重度耳聾稱為語前聾，在言語功能發(fā)育完成后開始的耳聾稱為語后聾。一般來說，常染色體隱性遺傳性耳聾表現(xiàn)為先天性聾或語前聾，常染色體顯性遺傳耳聾多表現(xiàn)為語后聾或漸進(jìn)性聽力下降。藥物性耳聾、大前庭水管綜合征等遺傳性耳聾也可表現(xiàn)為后天遲發(fā)性。遺傳性耳聾根據(jù)是否伴有多個(gè)系統(tǒng)病變分為綜合征型耳聾與非綜合征型耳聾，綜合征型耳聾一般除了聽力損傷外還伴有其他器官系統(tǒng)異常，表現(xiàn)為多種表型，與非綜合征型耳聾相比其遺傳背景更為復(fù)雜。目前遺傳性耳聾中約有30%為綜合征型耳聾，70%為非綜合征型耳聾。其中，非綜合征型常染色體隱性耳聾最常見，約占80%。

耳聾具有顯著的遺傳異質(zhì)性，不同的種族中常見的致聾基因不同，進(jìn)化過程造成了人種間遺傳差異、人群遷徙和血源融合又導(dǎo)致了局部地區(qū)人群遺傳背景的復(fù)雜化，中國(guó)耳聾人群中基因突變熱點(diǎn)、突變譜、表型與基因型對(duì)應(yīng)性與其他人種耳聾人群存在一定差異。在我國(guó)，約70%的遺傳性耳聾變異來自于GJB2、SLC26A4、GJB3及線粒體DNA 12SrRNA 等4個(gè)常見致聾基因。目前常規(guī)建議進(jìn)行的檢測(cè)位點(diǎn)主要涉及4個(gè)基因的9個(gè)突變位點(diǎn)，具體為GJB2基因：c.35delG、c.235delC、c.176-191dell6和c.299-300delAT；SLC26A4基因：c.2168A>G和c.919-2A>G（IVS7-2A>G）；GJB3基因：c.538C>T ；12SrRNA基因：m.1494C>T和m.1555A>G。各位點(diǎn)相關(guān)情況如下：

GJB 2基因： GJB2基因位于人類染色體13q11-12，其基因短小，包含2個(gè)外顯子，編碼226個(gè)氨基酸，編碼縫隙連接蛋白26，耳蝸縫隙連接蛋白的作用是維持內(nèi)耳鉀離子平衡，同時(shí)在內(nèi)耳的生理功能中發(fā)揮非常復(fù)雜的作用，包括參與第二信使的轉(zhuǎn)運(yùn)及耳蝸內(nèi)電位的產(chǎn)生。目前已發(fā)現(xiàn)的GJB2基因致聾突變超過200個(gè)，是迄今為止在多個(gè)人種中最常見的致聾基因，國(guó)外研究認(rèn)為常染色體隱性遺傳性耳聾患者中，約有50%由GJB2基因突變引起。但是該基因致聾比例在不同人種中存在差異。其主要突變方式為缺失，其中，c.235delC是中國(guó)人群中發(fā)生頻率最高的突變，其他位點(diǎn)還包括c.299-300delAT、c.176-191del16、c.35delG等。

SLC26A4基因：又稱PDS基因，位于人類染色體7q31,含有21個(gè)外顯子，編碼離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白，在機(jī)體離子成分平衡的維持中發(fā)揮重要作用。該基因突變是導(dǎo)致前庭水管擴(kuò)大（EVA）的責(zé)任基因，EVA是與兒童感音神經(jīng)性聾相關(guān)的最常見的內(nèi)耳畸形，大部分EVA患者變現(xiàn)為非綜合征型耳聾（DFNB4），少部分同時(shí)合并甲狀腺腫大，稱Pendred綜合征。對(duì)于該類患者往往變現(xiàn)為遲發(fā)性、漸進(jìn)性，頭部碰撞、感冒等會(huì)引起顱內(nèi)壓變化的活動(dòng)都可能會(huì)引起聽力下降。在我國(guó)，約96%的前庭水管擴(kuò)大患者由SLC26A4基因突變導(dǎo)致，中國(guó)耳聾人群中該基因突變檢出率為20.35%，目前發(fā)現(xiàn)的該基因致病突變眾多，突變位點(diǎn)及突變頻率存在地域和種族差異，在中國(guó)c.919-2A>G、c.2168A>G為攜帶頻率最高的SLC26A4基因熱點(diǎn)突變，其次還有c.1229C>T、c.1975G>C、c.1174A>T等。突變等位基因按外顯子排名由高到低為：外顯子7+8、外顯子10、外顯子19、外顯子17、外顯子15。發(fā)生在上述外顯子上突變約占90.61%。

GJB3基因：位于染色體1p35-p33，編碼縫隙連接蛋白31，是國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)、克隆并鑒定的第一個(gè)耳聾相關(guān)基因，可以引起常染色體顯性或者隱性遺傳。主要突變形式有c.538C>T的無義突變和c.547G>A的錯(cuò)義突變，其可能與語后高頻聽力下降相關(guān)，目前國(guó)外對(duì)GJB3基因突變引起耳聾的報(bào)道較少。

線粒體DNA（mtDNA）突變：mtDNA是存在于細(xì)胞質(zhì)中、獨(dú)立于核染色體的基因組，由于受精卵所含有的mtDNA來自于卵子的細(xì)胞質(zhì)，因此主要為母系遺傳。在細(xì)胞復(fù)制過程中mtDNA突變隨機(jī)分配，母親-子代突變比例可能差異較大，mtDNA存在狀態(tài)閾值，即只有突變型DNA達(dá)到一定負(fù)荷率或mtDNA功能缺陷到一定程度才會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)表型。由mtDNA突變而引起的耳聾包括綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾，其中mtDNA 12SrRNA上的m.1555A>G、m.1494C>T突變是氨基糖苷類藥物致聾的易感位點(diǎn)，突變攜帶者對(duì)氨基糖甙類藥物異常敏感，低劑量使用該類藥物就可能會(huì)出現(xiàn)耳鳴，甚至嚴(yán)重的聽力下降。此外，其他mtDNA突變還可能引起綜合征型耳聾，例如母系遺傳糖尿病伴耳聾等。

除上述列舉的代表性基因突變外，至今已有眾多其他耳聾相關(guān)的致病基因被克隆或鑒定，但還有很多耳聾表型的致病基因不清楚。隨著科學(xué)發(fā)展，可能發(fā)現(xiàn)其他意義明確的耳聾表型相關(guān)基因和突變位點(diǎn)并應(yīng)用于臨床。

目前，遺傳性耳聾基因突變檢測(cè)在遺傳性耳聾的輔助診斷以及新生兒遺傳性耳聾基因突變篩查等領(lǐng)域有重要意義。例如通過對(duì)具有耳聾癥狀和/或體征人群，以及其他需要進(jìn)行耳聾基因突變檢測(cè)的人群，如有耳聾家族史的人群等進(jìn)行耳聾基因突變的檢測(cè)可用于遺傳性耳聾的輔助診斷；對(duì)新生兒進(jìn)行遺傳性耳聾基因突變篩查，可作為常規(guī)物理聽力篩查的補(bǔ)充，特別是可發(fā)現(xiàn)常規(guī)物理聽力篩查無法檢出的藥物性致聾基因攜帶者和遲發(fā)性耳聾基因攜帶者，從而進(jìn)行早期干預(yù)和指導(dǎo)等。

遺傳性耳聾的診斷是一項(xiàng)復(fù)雜的工作，診斷流程包含常規(guī)診斷的病史采集、體格檢查、輔助檢查、對(duì)先證者及家系成員進(jìn)行家系分析和遺傳性檢測(cè)等。

結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實(shí)際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測(cè)人外周靜脈血或干血斑樣本中人基因組DNA的遺傳性耳聾基因突變，用于遺傳性耳聾的輔助診斷，或新生兒遺傳性耳聾相關(guān)基因突變的篩查，具體預(yù)期用途應(yīng)與產(chǎn)品臨床驗(yàn)證相對(duì)應(yīng)。

耳聾基因突變檢測(cè)方法眾多，國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的有高通量測(cè)序、飛行時(shí)間質(zhì)譜、限制性酶內(nèi)切法、熒光PCR法、微陣列芯片技術(shù)、PCR+導(dǎo)流雜交法等，其具體的檢測(cè)原理存在差異，目前以僅包含PCR擴(kuò)增反應(yīng)或后續(xù)結(jié)合探針雜交反應(yīng)進(jìn)行位點(diǎn)檢測(cè)的試劑盒較為常見，因此，本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求適用于主要基于PCR擴(kuò)增類（如熒光PCR法、微陣列芯片技術(shù)、PCR+導(dǎo)流雜交法）的檢測(cè)試劑，對(duì)于其他檢測(cè)技術(shù)（如PCR-質(zhì)譜、高通量測(cè)序），申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.應(yīng)明確檢測(cè)位點(diǎn)的臨床意義，尤其是對(duì)于新突變位點(diǎn)，應(yīng)提交關(guān)于新增位點(diǎn)的臨床意義的行業(yè)認(rèn)可證據(jù)（如國(guó)內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R(shí)）及支持性文獻(xiàn)等，詳述位點(diǎn)導(dǎo)致耳聾作用機(jī)制、遺傳方式、突變后果、突變檢出率以及中國(guó)人群數(shù)據(jù)等。

如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，申請(qǐng)人應(yīng)提供該基因新突變位點(diǎn)與耳聾表型相關(guān)的遺傳學(xué)證據(jù)，包括但不限于：耳聾患者和正常人群的等位基因突變頻率、耳聾患者家系共分離、生物信息學(xué)分析、權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)的信息等基于中國(guó)人群的充分的研究數(shù)據(jù)，以及基因突變和表型關(guān)系評(píng)估的資料，新突變位點(diǎn)應(yīng)具有明確致病性。

2.詳述檢測(cè)原理、引物探針與檢測(cè)位點(diǎn)對(duì)應(yīng)關(guān)系以及結(jié)果判斷等。

3.同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、檢測(cè)的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（原總局令第5號(hào)，以下簡(jiǎn)稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號(hào)），以下簡(jiǎn)稱《44號(hào)公告》的要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對(duì)照品/質(zhì)控品及企業(yè)參考品的研究資料。

1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測(cè)所需引物、探針、酶、dNTPs以及雜交反應(yīng)過程（如適用）中涉及的其他主要原材料（如標(biāo)記用酶等）。申請(qǐng)人應(yīng)提交各組分試劑中涉及的全部主要原材料的來源、篩選研究過程、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)資料等。如為申請(qǐng)人自制，應(yīng)提交詳細(xì)制備方法及過程，并應(yīng)保證工藝相對(duì)穩(wěn)定；如為外購(gòu)，應(yīng)注意明確原材料的供應(yīng)商，并應(yīng)提交供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。

1.1核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

1.2引物、探針

申請(qǐng)人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計(jì)原則、靶基因座位選擇，同時(shí)應(yīng)提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況，建議設(shè)計(jì)多套引物探針以供篩選，針對(duì)待測(cè)位點(diǎn)檢測(cè)準(zhǔn)確性、特異性等功能性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，選擇最佳設(shè)計(jì)，注意應(yīng)提交詳細(xì)的篩選過程研究數(shù)據(jù)及分析過程。

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，一般包括：序列準(zhǔn)確性、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)（如適用），以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3酶

酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具有熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對(duì)其純度、濃度等的驗(yàn)證資料，以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.5雜交用其他主要原材料（如適用）

根據(jù)具體產(chǎn)品提交雜交反應(yīng)涉及的其他主要原材料的選擇及驗(yàn)證資料，例如標(biāo)記用酶/生物素、雜交液試劑中關(guān)鍵原料等，明確其來源及相應(yīng)的技術(shù)指標(biāo)要求。

2.對(duì)照品/質(zhì)控品

試劑盒應(yīng)根據(jù)檢測(cè)原理設(shè)置各種對(duì)照品（質(zhì)控品）、質(zhì)控探針（如適用）實(shí)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)品整個(gè)反應(yīng)體系的有效監(jiān)控。對(duì)照品通常包含陽性對(duì)照、陰性和/或空白對(duì)照，其中陽性對(duì)照一般應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。對(duì)于PCR擴(kuò)增后需要采用探針雜交進(jìn)行位點(diǎn)檢測(cè)的試劑，還應(yīng)建立對(duì)雜交過程的質(zhì)控體系。

如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗(yàn)原理顯示：無論檢測(cè)何種樣本（野生型、雜合/異質(zhì)突變和純合/均質(zhì)突變），其反應(yīng)體系均可報(bào)出核酸序列結(jié)果，均可對(duì)檢測(cè)的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。

對(duì)照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系提取的基因組DNA或質(zhì)粒等。陰性/空白對(duì)照應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請(qǐng)人應(yīng)提供對(duì)照品來源、選擇、制備、基因序列確認(rèn)等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對(duì)其檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求。質(zhì)控探針/點(diǎn)涉及的主要原材料參照前述1.2及1.5進(jìn)行。

3.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品和精密度參考品等。申請(qǐng)人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。

3.1陽性參考品：陽性參考品應(yīng)包含所有位點(diǎn)的突變型（至少包含雜合型），參考品建議采用臨床樣本、細(xì)胞系或臨床樣本提取的基因組DNA制備，需提交詳細(xì)的細(xì)胞系構(gòu)建資料，樣本應(yīng)明確其來源及型別確認(rèn)資料。

3.2陰性參考品：建議包括野生型臨床樣本，可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列（如有）以及檢測(cè)范圍外其他檢測(cè)位點(diǎn)。參考品樣本要求參照陽性參考品，如涉及納入檢測(cè)范圍外其他罕見型別也可采用質(zhì)粒。

3.3檢測(cè)限參考品：濃度水平可選擇最低檢測(cè)限附近水平，應(yīng)包含所有位點(diǎn)的突變型（至少包含雜合型），對(duì)于線粒體突變，還應(yīng)包含最低檢出異質(zhì)性比例。參考品樣本要求參照陽性參考品進(jìn)行。

3.4精密度參考品：建議至少包括低濃度水平的代表性的突變位點(diǎn)和突變類型（覆蓋所有突變基因型）。參考品樣本要求參照陽性參考品進(jìn)行。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝研究資料應(yīng)提交工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）及其分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）、雜交芯片/雜交膜的制備（如涉及）、雜交過程所需的雜交液、顯色液及相關(guān)緩沖液（如涉及）等工藝過程中各參數(shù)詳細(xì)的選擇及確認(rèn)依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

反應(yīng)體系研究資料應(yīng)提交反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、PCR反應(yīng)體系、雜交體系以及其他檢測(cè)過程中涉及的反應(yīng)條件/參數(shù)等的確定。如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過程進(jìn)行的研究資料。

同時(shí)反應(yīng)體系研究資料中應(yīng)提供可檢測(cè)的總核酸濃度范圍的研究/確認(rèn)資料。即建議申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可準(zhǔn)確檢出的人基因組DNA濃度上限進(jìn)行研究驗(yàn)證。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評(píng)估資料，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則。

如試劑用于不同適用機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行性能評(píng)估。

1.適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法對(duì)每種樣本類型及添加劑（如抗凝劑）進(jìn)行適用性的研究確認(rèn)。對(duì)于不同的樣本類型（如外周血和干血斑）應(yīng)分別提交相應(yīng)的分析性能評(píng)估資料。

2.核酸提取/純化性能

在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測(cè)試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請(qǐng)人都應(yīng)對(duì)配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的研究驗(yàn)證，并評(píng)價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。不同樣本類型應(yīng)分別進(jìn)行核酸提取/純化性能的研究驗(yàn)證。

3.檢測(cè)準(zhǔn)確性

應(yīng)采用臨床樣本驗(yàn)證該類產(chǎn)品的檢測(cè)準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致，應(yīng)包含所有位點(diǎn)突變型，至少包含雜合型樣本，盡量納入純合型樣本，對(duì)于線粒體突變，應(yīng)盡量納入異質(zhì)型。同時(shí)建議考察對(duì)復(fù)合突變樣本/人工構(gòu)建質(zhì)粒的檢出能力。

提供所有試驗(yàn)用樣本來源、型別確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

4.最低檢出限

該類產(chǎn)品的最低檢測(cè)限可定義為：在滿足一定的檢測(cè)準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度，如包含線粒體突變，還應(yīng)考察特定核酸濃度下的最低可檢出的突變比例（異質(zhì)性比例）。

最低檢測(cè)限確立：可采用常見突變類型的臨床樣本，對(duì)人基因組DNA樣本梯度稀釋，對(duì)每個(gè)濃度水平重復(fù)檢測(cè)3～5次，可通過以100%可檢出的最低濃度作為估計(jì)檢測(cè)限，然后在此濃度附近制備若干濃度梯度樣本，每個(gè)濃度至少重復(fù)20次檢測(cè)，將具有95%檢出率水平濃度作為最低檢測(cè)限。

最低檢出限的驗(yàn)證：應(yīng)對(duì)試劑盒涵蓋的所有的檢測(cè)位點(diǎn)進(jìn)行檢出能力的驗(yàn)證，至少包含所有位點(diǎn)雜合型臨床樣本。

對(duì)線粒體突變還應(yīng)考察研究特定核酸濃度下的最低突變比例（異質(zhì)性比例），研究時(shí)可采用均質(zhì)突變與野生型混合制備系列不同異質(zhì)性比例樣本，考察在各固定核酸濃度下不同異質(zhì)性比例的檢出情況，并確定出可滿足最低核酸濃度下可檢出的最低異質(zhì)性比例，應(yīng)至少包含20次重復(fù)檢測(cè)，達(dá)到95%的檢出率。

應(yīng)提供所有試驗(yàn)用樣本來源、型別及濃度（含異質(zhì)性比例）確定的方法等試驗(yàn)資料。

5.分析特異性

分析特異性受干擾和交叉反應(yīng)的影響。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)樣本中常見的干擾物質(zhì)和可能引起交叉反應(yīng)的物質(zhì)進(jìn)行研究。

5.1交叉反應(yīng)：應(yīng)針對(duì)野生型、非人類基因組、核酸序列相近或具有同源性、以及其他易引起交叉反應(yīng)的突變類型序列（如待測(cè)位點(diǎn)附近的其他突變位點(diǎn)、其他耳聾基因等）進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。同時(shí)申請(qǐng)人還應(yīng)驗(yàn)證檢測(cè)范圍內(nèi)各基因及突變位點(diǎn)間的交叉干擾。申請(qǐng)人應(yīng)提交交叉反應(yīng)基因的選擇依據(jù)（如耳聾基因背景、發(fā)病情況），說明交叉反應(yīng)樣本的來源/制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

5.2干擾試驗(yàn)：應(yīng)針對(duì)可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、膽固醇等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑、常用藥物干擾等。針對(duì)不同樣本類型，建議分別進(jìn)行相應(yīng)的干擾研究。

干擾試驗(yàn)可采用配對(duì)比對(duì)的方式，比較干擾樣本和不包含或含正常濃度水平干擾物樣本檢測(cè)結(jié)果間差異?？赏ㄟ^在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評(píng)價(jià)干擾物質(zhì)對(duì)目標(biāo)序列檢測(cè)的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)。對(duì)于線粒體突變，建議考察最低異質(zhì)性比例下的干擾。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。

6.精密度

精密度評(píng)價(jià)應(yīng)至少包含野生型及常見代表性突變位點(diǎn)和突變類型（覆蓋所有突變基因）的臨床樣本。試驗(yàn)操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。此外，如產(chǎn)品包含多個(gè)反應(yīng)管，建議每個(gè)反應(yīng)管均應(yīng)進(jìn)行精密度研究。精密度評(píng)價(jià)需滿足如下要求：

6.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測(cè)輪次和試劑批次等。

6.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

6.3用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本建議包含最低檢出限水平和中/高濃度。最低檢測(cè)限水平下，檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）;中/高濃度水平下，檢出率應(yīng)≥100%（n≥20）。

6.4申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有）。

7.提供企業(yè)參考品驗(yàn)證資料：根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

（五）陽性判斷值確定資料

建議申請(qǐng)人采用一定量的臨床樣本，結(jié)合產(chǎn)品特性采用受試者工作曲線或其他合理方法對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)/臨界值進(jìn)行研究確認(rèn)。陽性判斷值研究應(yīng)涵蓋野生型和所有檢測(cè)位點(diǎn)的突變型（至少納入雜合型）。同時(shí)應(yīng)提供內(nèi)標(biāo)（如適用）的研究資料。

對(duì)于某些檢測(cè)方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請(qǐng)人應(yīng)說明理由。

應(yīng)提交詳細(xì)的研究方案（包含臨床樣本的來源、型別確認(rèn)等資料）、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析過程。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究?jī)刹糠?。前者主要包括申?bào)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時(shí)間等的研究。如核酸提取液可保存，還需對(duì)核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)品性能評(píng)價(jià)，應(yīng)持續(xù)進(jìn)行至成品有效期后，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。

（七）臨床評(píng)價(jià)資料

臨床試驗(yàn)應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1．針對(duì)“遺傳性耳聾的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途

1.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員

申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

1.2臨床試驗(yàn)適用人群和樣本類型

具有耳聾癥狀和/或體征人群，以及其他需要進(jìn)行耳聾基因突變檢測(cè)的人群，如有耳聾家族史的人群等。

臨床試驗(yàn)所用樣本一般為抗凝外周血樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報(bào)試劑說明書、對(duì)比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

如申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型包括抗凝外周血以外的其他樣本，如干血斑，請(qǐng)確認(rèn)該樣本類型的預(yù)期用途是否為遺傳性耳聾的輔助診斷，入組人群是否與其預(yù)期用途一致；如不同，則應(yīng)選擇其適用人群進(jìn)行相應(yīng)預(yù)期用途的臨床試驗(yàn)。

1.3臨床試驗(yàn)方法

1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品

對(duì)于已批準(zhǔn)的遺傳性耳聾相關(guān)基因突變位點(diǎn)，原則上應(yīng)選擇已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，對(duì)比試劑應(yīng)涵蓋考核試劑的檢測(cè)位點(diǎn)，以此評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測(cè)性能。

1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品

1.3.2.1如新突變位點(diǎn)的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國(guó)內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R(shí)），且上述認(rèn)可基于充分的中國(guó)人群的臨床研究數(shù)據(jù)，則臨床試驗(yàn)可選擇參考方法（如一代測(cè)序法）作為對(duì)比方法，評(píng)價(jià)新突變位點(diǎn)的臨床檢測(cè)性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點(diǎn)臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可在其他臨床證據(jù)中提交。

1.3.2.2如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，申請(qǐng)人首先應(yīng)提供該基因新突變位點(diǎn)與耳聾表型相關(guān)的遺傳學(xué)證據(jù)，包括但不限于：耳聾患者和正常人群的等位基因突變頻率、耳聾患者家系共分離、生物信息學(xué)分析、權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)的信息等基于中國(guó)人群的充分的研究數(shù)據(jù)，對(duì)基因突變和表型的關(guān)系進(jìn)行評(píng)估，具有明確致病性的基因突變位點(diǎn)方可納入。

臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩個(gè)目的，新突變位點(diǎn)的臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)和臨床意義評(píng)價(jià)。新突變位點(diǎn)的臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)可參考1.3.2.1；新突變位點(diǎn)的臨床意義評(píng)價(jià)應(yīng)分析基因型與臨床表型的相關(guān)性，基因型與表型的相關(guān)性可通過隨訪或其他臨床驗(yàn)證資料來證明。建議同時(shí)對(duì)所檢出攜帶新突變位點(diǎn)的耳聾患者進(jìn)行家系分析。

1.4最低樣本量和陽性例數(shù)

臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。

臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)的樣本量估算可分為以下幾種情況。

建議采用單組目標(biāo)值法分別估算臨床試驗(yàn)的最低樣本量，通過陽性符合率和陰性符合率來分別計(jì)算所需陽性樣本和陰性樣本的例數(shù)，同時(shí)考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。

對(duì)于常見突變位點(diǎn)，其陽性總例數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，建議納入一定的純合突變（如GJB2的c.235delC、SLC26A4的c.919-2A>G等）。

對(duì)于罕見突變位點(diǎn)，陽性樣本也應(yīng)有一定的例數(shù)。

對(duì)于同時(shí)申報(bào)外周血與干血斑兩種樣本類型的產(chǎn)品，其臨床試驗(yàn)每種樣本類型應(yīng)單獨(dú)統(tǒng)計(jì)，滿足上述要求。

2.針對(duì)“新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查”預(yù)期用途

針對(duì)上述預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則基于目前的認(rèn)知水平進(jìn)行了闡述，不盡之處申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能研究需求，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)并進(jìn)行評(píng)價(jià)。

申請(qǐng)?jiān)擃A(yù)期用途的申報(bào)產(chǎn)品，其檢測(cè)的基因及突變位點(diǎn)，均應(yīng)為已得到行業(yè)內(nèi)公認(rèn)的、與遺傳性耳聾具有明確致病性關(guān)系的基因位點(diǎn)。新生兒遺傳性耳聾基因突變篩查用途的應(yīng)用應(yīng)符合國(guó)家及地方衛(wèi)生管理部門的相關(guān)規(guī)定。

2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和人員

應(yīng)選擇至少3家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途選擇具有相關(guān)資質(zhì)的機(jī)構(gòu)（各地衛(wèi)生健康部門指定的進(jìn)行新生兒耳聾基因篩查的臨床機(jī)構(gòu)）。建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有相關(guān)檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)。操作人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)的培訓(xùn)，并能熟練操作實(shí)驗(yàn)。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》及其他相關(guān)規(guī)定。試驗(yàn)應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

2.2臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本

如預(yù)期用途為新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查，則適用人群為新生兒。

臨床試驗(yàn)所用樣本一般為干血斑樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。

2.3最低樣本量和陽性例數(shù)

臨床試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)選擇合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)模型同時(shí)結(jié)合適用人群基因突變頻率進(jìn)行樣本量估算，并在臨床試驗(yàn)方案中明確樣本量確定的依據(jù)。

根據(jù)臨床發(fā)病率、臨床診治情況及其他因素綜合考慮，對(duì)于我國(guó)相對(duì)常見的遺傳性耳聾突變位點(diǎn)，如GJB2的c.235delC、c.299_300delAT、c.176-191del16，SLC26A4的c.919-2A>G、c.2168A>G、線粒體DNA 12S rRNA的m.1555A>G突變等，應(yīng)通過前瞻性臨床試驗(yàn)檢出突變病例，總例數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求；其他人群突變率相對(duì)更低的突變位點(diǎn)也應(yīng)盡可能在前瞻性臨床試驗(yàn)中檢出。

2.4臨床試驗(yàn)方法

建議臨床試驗(yàn)采取前瞻性入組病例的形式，考核試劑對(duì)所有入組病例進(jìn)行檢測(cè)，病例基因變異狀態(tài)采用臨床參考標(biāo)準(zhǔn)（如：一代測(cè)序法）進(jìn)行確認(rèn)，評(píng)價(jià)考核試劑的臨床性能。臨床試驗(yàn)過程中，對(duì)于先天性耳聾患者等，應(yīng)提供病例的臨床診斷結(jié)果，臨床診斷結(jié)果應(yīng)有充分的依據(jù)，如采用現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病診療指南中明確的疾病診斷方法，行業(yè)內(nèi)的專家共識(shí)等。

申請(qǐng)人還應(yīng)同時(shí)選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品或參考方法作為對(duì)比試劑，與考核試劑進(jìn)行一定例數(shù)的比較研究試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)考核試劑的臨床準(zhǔn)確性。此部分驗(yàn)證位點(diǎn)應(yīng)涵蓋申報(bào)產(chǎn)品的所有突變位點(diǎn)。此部分研究可使用部分已確診（回顧性）的陽性病例進(jìn)行研究。應(yīng)在試驗(yàn)方案和報(bào)告中對(duì)病例選擇的方式和原因進(jìn)行明確的說明。

應(yīng)針對(duì)篩查用途的驗(yàn)證和準(zhǔn)確性驗(yàn)證，分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計(jì)科學(xué)的臨床試驗(yàn)，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。

4.不同預(yù)期用途的通用要求

4.1臨床試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析

4.1.1應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案或報(bào)告中明確申報(bào)產(chǎn)品、對(duì)比試劑和第三方試劑的試驗(yàn)方法。

4.1.2臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總表應(yīng)以列表方式表示，包括申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果、對(duì)比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測(cè)結(jié)果（如有）、年齡、性別、臨床診斷以及臨床背景信息（新生兒篩查應(yīng)提供新生兒聽力篩查結(jié)果。用于輔助診斷時(shí)，具有耳聾癥狀和/或體征的人群應(yīng)提供必要的聽力學(xué)及影像學(xué)檢查結(jié)果：如聲導(dǎo)抗、ABR和DPOAE，必要時(shí)提供CT或MRI結(jié)果）。

4.1.3以四格表分別總結(jié)考核試劑與對(duì)比試劑/方法的定性檢測(cè)結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。除總體統(tǒng)計(jì)外，還要針對(duì)每一個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)純合突變以及雜合突變（或均質(zhì)突變和異質(zhì)突變）應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證考核試劑與對(duì)比試劑/方法檢測(cè)結(jié)果的一致性。

4.1.4結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對(duì)差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

4.2臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案制定應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由該實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對(duì)比試劑/方法對(duì)樣本類型的要求。

4.3臨床試驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

4.4其他

如申報(bào)產(chǎn)品可適用《用于罕見病防治醫(yī)療器械注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》，則具體要求可參照該指導(dǎo)原則。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號(hào)公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。

如有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)應(yīng)提交連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)報(bào)告。如有適用的國(guó)家參考品發(fā)布，產(chǎn)品檢驗(yàn)應(yīng)滿足國(guó)家參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對(duì)該類產(chǎn)品說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人XX樣本基因組DNA中的遺傳性耳聾基因XX（列舉具體的檢測(cè)基因及位點(diǎn)）突變。

1.2本產(chǎn)品用于遺傳性耳聾的輔助診斷。檢測(cè)結(jié)果僅代表對(duì)患者的遺傳性耳聾相關(guān)基因位點(diǎn)的檢測(cè)，僅供臨床醫(yī)生參考，不能作為診斷遺傳性耳聾的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者其他診斷信息對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

如用于新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查，預(yù)期用途可表述為：本產(chǎn)品可用于新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查。其檢測(cè)結(jié)果僅代表對(duì)新生兒的遺傳性耳聾相關(guān)基因位點(diǎn)的檢測(cè)，關(guān)于新生兒遺傳性耳聾的診斷，應(yīng)依據(jù)相關(guān)的診療流程。

1.3介紹耳聾相關(guān)的臨床背景信息及實(shí)驗(yàn)室診斷方法等，介紹被測(cè)靶標(biāo)（突變位點(diǎn)）的相關(guān)情況，說明各檢測(cè)位點(diǎn)的臨床意義。

2.【檢驗(yàn)原理】

對(duì)試劑盒的技術(shù)原理進(jìn)行詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。對(duì)試劑盒所用探針、引物及突變的判定等進(jìn)行詳細(xì)描述，對(duì)不同樣本反應(yīng)管組合（如涉及）、雜交芯片/雜交膜設(shè)計(jì)（如涉及）、對(duì)照品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行說明。

3.【主要組成成分】

3.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。

3.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗(yàn)證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及醫(yī)療器械備案號(hào)等詳細(xì)信息。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲(chǔ)存條件及有效期等信息。明確開瓶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)限制等內(nèi)容。

5.【樣本要求】

樣本的采集、處理、檢測(cè)要求、運(yùn)送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化方法、DNA純度及濃度/濃度范圍要求、樣本及核酸提取液的保存要求，包括具體的保存條件及期限等。

6.【適用儀器】

明確經(jīng)驗(yàn)證的所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。

7.2試劑配制方法和注意事項(xiàng)。

7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)（如適用），對(duì)核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)控，應(yīng)注意需明確提取核酸的濃度及純度等質(zhì)量要求。

7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測(cè)程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.6雜交及顯色體系（如涉及）中各步驟所涉及的反應(yīng)時(shí)間、溫度儀器設(shè)置及其他步驟參數(shù)。

7.7最終檢測(cè)及結(jié)果判讀過程。

8.【陽性判斷值】

簡(jiǎn)要概述陽性判斷值具體判斷標(biāo)準(zhǔn)及研究驗(yàn)證情況。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合對(duì)照品、樣本管/雜交芯片/雜交膜（如涉及）檢測(cè)結(jié)果以及檢測(cè)類型，以列表/圖片形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)詳述對(duì)于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

10.1申報(bào)產(chǎn)品僅對(duì)下述突變位點(diǎn)和突變類型XX進(jìn)行了驗(yàn)證。

10.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析

10.2.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

10.2.2未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

10.3該產(chǎn)品不能涵蓋與遺傳性耳聾相關(guān)的全部位點(diǎn)，未檢出突變不能排除攜帶其他突變位點(diǎn)。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】根據(jù)分析性能研究資料，編寫概述以下性能指標(biāo)：

11.1對(duì)相應(yīng)國(guó)家參考品（如有）檢測(cè)的符合情況。

11.2準(zhǔn)確性：簡(jiǎn)述研究用樣本、試驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)結(jié)果。

11.3最低檢測(cè)限：簡(jiǎn)單介紹最低檢測(cè)限的確定方法，并明確最低檢測(cè)限結(jié)果，包括線粒體突變最低檢出異質(zhì)性比例。

11.4精密度：簡(jiǎn)單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。

11.5分析特異性

11.5.1交叉反應(yīng)驗(yàn)證：交叉反應(yīng)驗(yàn)證情況。

11.5.2干擾物質(zhì)驗(yàn)證：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

11.6企業(yè)內(nèi)部參考品符合率。

11.7臨床試驗(yàn)：簡(jiǎn)要介紹臨床試驗(yàn)樣本、試驗(yàn)方法、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

12.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、起草單位

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。