引言：2020年1月9日，國(guó)家藥監(jiān)局發(fā)布公告，對(duì)《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見(jiàn)稿）》面向公眾公開(kāi)征求意見(jiàn)，這個(gè)指導(dǎo)原則，對(duì)無(wú)菌醫(yī)療器械注冊(cè)產(chǎn)品有重大影響。

各有關(guān)單位：
　　為規(guī)范同種異體植入性醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)中病毒滅活工藝驗(yàn)證相關(guān)資料，根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2019年度醫(yī)療器械注冊(cè)技術(shù)指導(dǎo)原則制修訂計(jì)劃的有關(guān)要求，我中心組織起草了《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見(jiàn)稿）》。經(jīng)調(diào)研討論，形成征求意見(jiàn)稿。
　　為使該指導(dǎo)原則更具有科學(xué)合理性及實(shí)際可操作性，即日起在我中心網(wǎng)上公開(kāi)征求意見(jiàn)，衷心希望相關(guān)領(lǐng)域的專(zhuān)家、學(xué)者、管理者及從業(yè)人員提出意見(jiàn)或建議，推動(dòng)指導(dǎo)原則的豐富和完善。
　　請(qǐng)將意見(jiàn)或建議以電子郵件的形式于2020年2月7日前反饋我中心。
　　聯(lián)系人：孫嘉懌、李曉云
　　電話： 010-86452810、010-86452822
　　電子郵箱：sunjy@cmde.org.cn，lixy@cmde.org.cn

　　附件：1.同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見(jiàn)稿）（下載）
　　　　　2.意見(jiàn)反饋表（下載）

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　國(guó)家藥品監(jiān)督管理局

醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心

2020年1月9日

同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）

一、前言

同種異體植入性醫(yī)療器械是以同種來(lái)源組織為原料經(jīng)加工或組成的產(chǎn)品。

我國(guó)目前對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測(cè)血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對(duì)人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測(cè)血清中的病毒核酸。但是，盡管對(duì)供體進(jìn)行了嚴(yán)格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，以及生產(chǎn)過(guò)程中帶入外源病毒的風(fēng)險(xiǎn)。因此，要求同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過(guò)程中采用有效的病毒滅活工藝，并對(duì)病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗(yàn)證。

本指導(dǎo)原則是對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械生產(chǎn)過(guò)程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審評(píng)人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。

本指導(dǎo)原則為2011年發(fā)布的《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的修訂版。主要修訂內(nèi)容包括：修改指導(dǎo)原則中相關(guān)語(yǔ)言描述；完善指示病毒類(lèi)型及舉例的相關(guān)描述；調(diào)整病毒滅活/去除有效性驗(yàn)證的原則。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于需要對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的同種異體植入性醫(yī)療器械。

三、基本要求

（一）常用的病毒滅活方法

同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應(yīng)綜合考慮以下問(wèn)題，包括病毒滅活效果的驗(yàn)證；病毒滅活工藝對(duì)產(chǎn)品性能的影響；病毒滅活工藝本身的公認(rèn)性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟(jì)性。常用的病毒滅活方法舉例如下：

1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）

巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的病毒滅活方法。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫(yī)療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運(yùn)用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時(shí)間。

2.干熱滅活法

干熱滅活法主要用于凍干制品的病毒滅活。該方法的病毒滅活效果已為實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證和臨床應(yīng)用所肯定，可滅活HIV、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和甲型肝炎病毒（HAV）等多種病毒。干熱滅活法的優(yōu)勢(shì)是可用于凍干后的同種異體植入性醫(yī)療器械。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性、凍干工藝和產(chǎn)品水分殘留量等。

3.γ射線輻照滅活法

γ射線輻照滅活法的主要優(yōu)點(diǎn)包括滅活效率高、穿透力強(qiáng)、劑量易控制、無(wú)有害物質(zhì)殘留、無(wú)明顯溫度升高等。該方法主要通過(guò)破壞核酸而滅活病毒。由于病毒在不同介質(zhì)中對(duì)射線的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活時(shí)，應(yīng)去除產(chǎn)品中的宿主組織和細(xì)胞，例如同種異體骨應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮輻照劑量的分布和滅活時(shí)間。

4.過(guò)氧乙酸-乙醇滅活法

過(guò)氧乙酸具有極強(qiáng)的病毒滅活能力；乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。過(guò)氧乙酸-乙醇滅活法是一種可靠的病毒滅活方法，可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒（PV）、HIV、偽狂犬病病毒（PRV）；牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；豬細(xì)小病毒（PPV）等多種病毒，其用于同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活的效果已為實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制產(chǎn)品過(guò)氧乙酸殘留量。

5.乙醇滅活法

乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對(duì)多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、HIV等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時(shí)，應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分，應(yīng)采用浸泡處理，采用該方法時(shí)應(yīng)考慮乙醇濃度和滅活時(shí)間。

（二）病毒滅活工藝的驗(yàn)證

1.指示病毒的選擇

應(yīng)選擇可能污染的病毒，或理化性質(zhì)相似的病毒。在病毒顆粒的大小、核酸類(lèi)型以及有無(wú)包膜等方面應(yīng)具有代表性，應(yīng)包括一種對(duì)物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，應(yīng)至少選擇四類(lèi)指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無(wú)包膜RNA病毒、無(wú)包膜DNA病毒，可參照下表選擇適宜的指示病毒，至少應(yīng)包括HIV和HAV、HBV、HCV的指示病毒

表1 可經(jīng)同種異體植入性醫(yī)療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及

可選用的指示病毒（舉例）

注：DHBV：鴨乙型肝炎病毒；CPV：犬細(xì)小病毒。

2.染毒方法

由于同種異體植入性醫(yī)療器械多為固體形態(tài)，應(yīng)盡量模擬植入材料的病毒負(fù)載方式，同時(shí)考慮材料的結(jié)構(gòu)、尺寸和致密性，以及病毒在材料中的分布情況，建議采用浸泡法染毒（若適用）。病毒滅活零時(shí)的滴度應(yīng)至少≥106/mL，可根據(jù)產(chǎn)品和病毒的特點(diǎn)，選擇合適的浸泡溫度、時(shí)間及其他條件。

3.方案設(shè)計(jì)

（1）試驗(yàn)分組：應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對(duì)照組，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議至少包括細(xì)胞空白對(duì)照組、病毒對(duì)照組、樣品細(xì)胞毒性對(duì)照組或滴定前進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)、病毒滅活方法終止對(duì)照組及試驗(yàn)組。其中，病毒對(duì)照組的滴度是計(jì)算滅活量的基礎(chǔ)，應(yīng)證實(shí)其病毒的零時(shí)滴度≥106/mL。病毒滅活方法終止效果對(duì)照組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應(yīng)與病毒對(duì)照組相當(dāng)或接近，以證實(shí)病毒滅活方法能夠在設(shè)定的時(shí)間終止作用。試驗(yàn)組至少應(yīng)有適宜的時(shí)間點(diǎn)（包括零時(shí)），以闡明病毒滅活的動(dòng)力學(xué)，包括滅活動(dòng)力學(xué)曲線。

（2）觀察指標(biāo)：

①滅活病毒的滴度，采用細(xì)胞病變或其他適宜的指標(biāo)。

②病毒滅活速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。

（3）病毒滅活效果的判定

應(yīng)綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評(píng)價(jià)每次驗(yàn)證結(jié)果。

①所選擇的病毒是否適宜，驗(yàn)證的設(shè)計(jì)是否合理。

②病毒滴度降低量：病毒滅活零時(shí)的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過(guò)與病毒滅活后測(cè)定的殘留病毒量的比較，計(jì)算出該方法實(shí)際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如因檢測(cè)方法的靈敏度造成檢測(cè)出的病毒降低系數(shù)接近但小于4 logs時(shí)，應(yīng)盲傳三代，如無(wú)病毒檢出，亦可認(rèn)為是有效地去除/滅活病毒步驟。病毒去除/滅活有效性驗(yàn)證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，因此需獲得生產(chǎn)全過(guò)程中估計(jì)去除/滅活病毒的總降低量。一般每種指示病毒的總降低量為各步驟降低數(shù)量的總和。但是由于驗(yàn)證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低量≤1 log，則不宜將其計(jì)算在總量中。

③病毒滅活動(dòng)力學(xué)：病毒滅活通常不是簡(jiǎn)單的一級(jí)反應(yīng)，評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時(shí)也要考慮病毒滅活動(dòng)力學(xué)。需以作圖的形式報(bào)告滅活動(dòng)力學(xué)驗(yàn)證結(jié)果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說(shuō)明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時(shí)才達(dá)到最低檢出限度值，則不能認(rèn)為是一個(gè)有效的病毒滅活方法，或者殘留的指示病毒對(duì)該滅活方法有抵抗力，說(shuō)明該步病毒滅活方法無(wú)效。

4.病毒滅活工藝驗(yàn)證原則

（1）若申請(qǐng)人采用一個(gè)病毒滅活工藝，應(yīng)同時(shí)對(duì)有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無(wú)包膜RNA病毒、無(wú)包膜DNA病毒等四類(lèi)病毒或其指示病毒（參見(jiàn)表1）的滅活效果均達(dá)到4logs以上，可認(rèn)為是有效病毒滅活工藝。

（2）若申請(qǐng)人采用一個(gè)病毒滅活工藝，無(wú)法滿足（1）的要求，建議申請(qǐng)人生產(chǎn)過(guò)程中采用兩種（或兩種以上）不同滅活原理的病毒滅活工藝，并分別進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證，保證每個(gè)病毒有至少一個(gè)滅活工藝可使其滅活效果達(dá)到4logs以上。

（3）若采用的病毒滅活/去除工藝將導(dǎo)致醫(yī)療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據(jù)產(chǎn)品來(lái)源、采集及過(guò)程控制情況以及對(duì)患者的風(fēng)險(xiǎn)/受益分析來(lái)判斷其可接受性，但其單一去除/滅活病毒步驟的降低系數(shù)仍需達(dá)到4 logs以上。

5．舉例說(shuō)明病毒滅活效果的判斷

（1）初始病毒負(fù)載率為6 logs ，檢測(cè)到剩余病毒量為4 logs，則該病毒滅活工藝不是有效工藝，只能說(shuō)明具有一定的病毒滅活作用。

（2）初始病毒負(fù)載量為6 logs ，但由于產(chǎn)品本身的細(xì)胞毒作用使得檢測(cè)靈敏度限值為4 logs ，僅能證明滅活2 logs 的病毒。此種情況需改變?cè)囼?yàn)設(shè)計(jì)重新進(jìn)行驗(yàn)證，或者應(yīng)盲傳三代，如仍無(wú)病毒檢出，可認(rèn)為是有效的病毒滅活方法。

（3）初始病毒負(fù)載率為6 logs ，但仍可檢測(cè)到2 logs 的剩余病毒，且清除病毒的量可重復(fù)，并不受工藝的影響，應(yīng)認(rèn)為是有效的滅活病毒的方法。

（4）初始病毒負(fù)載量為6 logs ，之后未檢測(cè)出病毒。但是由于檢測(cè)靈敏度限值為2 logs ，僅能認(rèn)為大約滅活了4 logs 病毒。事實(shí)上可能等于或大于4 logs ，因此應(yīng)判定此方法清除的病毒量≥4 logs。

6．其他需考慮的問(wèn)題

（1）病毒滅活驗(yàn)證研究應(yīng)在具有相應(yīng)資質(zhì)的單位完成。

（2）如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)考慮這些處理方法對(duì)病毒檢測(cè)結(jié)果的影響。

（3）模擬的生產(chǎn)工藝參數(shù)應(yīng)盡可能與實(shí)際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間等。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對(duì)病毒滅活效果的影響。

（4）病毒滅活工藝對(duì)不同類(lèi)型病毒滅活的選擇性。

（三）病毒滅活工藝的再驗(yàn)證

生產(chǎn)過(guò)程發(fā)生改變且可能影響特定病毒滅活工藝的效果時(shí)；被滅活前產(chǎn)品的組成或pH值發(fā)生改變時(shí)，均需對(duì)病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗(yàn)證。

四、名詞解釋

1．同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來(lái)源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細(xì)胞異體真皮等。

2．植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：

－ 全部導(dǎo)入人體；

－ 替代上皮表面或眼表面；

通過(guò)外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過(guò)外科侵入方法，部分導(dǎo)入人體保留至少30天的器械，也認(rèn)作是植入性器械。

3．病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對(duì)其產(chǎn)品進(jìn)行病毒滅活。

五、參考文獻(xiàn)

1．《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（國(guó)藥監(jiān)注〔2002〕160號(hào)）

2．《消毒技術(shù)規(guī)范》衛(wèi)生部2002版

3.YY/T 0340-2002 《外科植入物 基本原則》